在植物病理學(xué)研究工作中經(jīng)常要使用各種不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)，用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。其中含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、維生素以及水分等。微生物在培養(yǎng)基上生長繁殖還必須在zui適pH范圍內(nèi)才能生長得更好，因此，對不同種類的微生物應(yīng)將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到一定的pH范圍。
培養(yǎng)基的種類很多，不同的微生物所需要的培養(yǎng)基不同。依物理性狀可分為液體的、固體的和半固體的三種。固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入1．5％--2％的瓊脂，半固體培養(yǎng)基是加入0．2％～0．5％的瓊脂。瓊脂又稱瓊膠或洋菜，是由海藻加工而成，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定一般微生物均不能分解利用。它在95℃熱水中溶化成溶膠，冷卻到45℃以下時又重新凝固，故一般實驗中常用它作為凝固劑。
根據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)來源的不同，培養(yǎng)基可分為天然、半合成和合成培養(yǎng)基三類。天然培養(yǎng)基是以自然界原有的有機(jī)物為材料經(jīng)滅菌后制成，如馬鈐薯、胡 蘿卜水果、大麥粒、高粱粒等。半合成培養(yǎng)基中既有一些天然的有機(jī)物質(zhì)，又有一些成分簡單或明確的化合物。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)、肉汁胨培養(yǎng)基(NA)等。合成培養(yǎng)基是由一些成分明確的化合物配制而成的，無任何成分不明確的物質(zhì)，常用于研究微生物的生理生化性狀，如查氏(Czapek)培養(yǎng)基等。
根據(jù)培養(yǎng)基用途不同，可分為生長繁殖培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基、貯存培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基等。在植物病理學(xué)研究中，zui常用培養(yǎng)基有馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，主要用于分離培養(yǎng)病原真菌。
在培養(yǎng)基配制完之后，必須經(jīng)過滅菌，以便*殺死其中原有的一切微生物。
三、材料、試劑與儀器
1．材料馬鈴薯。
2．試劑 葡萄糖、瓊脂等。
3．儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙(或酸度計)、試管、鋁鍋、攪拌棒、三角瓶、燒杯、漏斗、量筒、紗布、棉花、天平等。
四、操作步驟
PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基)配方：去皮馬鈴薯200g 葡萄糖20g瓊脂15—20g蒸餾水1000ml 自然pH。在PDA培養(yǎng)基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，這樣配制的培養(yǎng)基也稱為PSA培養(yǎng)基。
(1)稱量。稱量去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15--20g。提示：瓊脂加入的量取決于瓊脂的質(zhì)量，質(zhì)量好的15g就夠了，質(zhì)量差的
應(yīng)適當(dāng)增加。另外，在夏天氣溫較高時，適當(dāng)增加用量。
(2)將馬鈴薯切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。
3)將馬鈴薯濾液放回鍋中，加入瓊脂，加熱熔化。
提示：在瓊脂熔化的過程中，需要用玻璃棒不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。
(4)加入葡萄糖。葡萄糖溶解后，加入適量的水以補(bǔ)充加熱過程中損失的水分，定容至1000ml。
提示：通常在制作培養(yǎng)基的鍋內(nèi)用紅藍(lán)鉛筆標(biāo)記出不同體積的刻度，如1000ml、2000ml等，在定容時直接將水加至已標(biāo)記的刻度即可。
(5)分裝。根據(jù)不同的實驗?zāi)康模蓪⑴渲频?a href="http://www.hbzhan.com/st164341/list_722412.html">培養(yǎng)基分裝于試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)。分裝試管，其量為管高的1／5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。
(6)加塞。在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經(jīng)彈松的棉花，棉塞可過濾空氣，防止雜菌侵入并可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)，故在植物病理學(xué)研究工作中普遍使用。
正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口*適合，過緊時妨礙空氣流通，操作不便；過松則達(dá)不到濾菌的目的，且棉塞過小往往容易掉進(jìn)試管內(nèi)。正確的棉塞頭較大，約有1／3在外，2／3在試管內(nèi)。分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾染在管(瓶)口上以免浸濕棉塞，引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽，為讓空氣可以自由進(jìn)出，橡皮塞不要過緊，滅菌前應(yīng)夾一紗線在管口。
(7)包扎。加塞后，將試管用線繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、組別、制作人等。
(8)滅菌。將上述培養(yǎng)基以0．103MPa，121C，高壓蒸氣滅菌20min。
(9)擱置斜面。將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至5013左右(以防斜面上冷凝水太多)，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37C溫箱培養(yǎng)24h，無菌生長者方可使用。PDA培養(yǎng)基一般不需要調(diào)pH。對于要調(diào)節(jié)pH的培養(yǎng)基，一般用pH試
紙測定其pH。如果培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)時應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞培養(yǎng)基成分。
提示：pH不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養(yǎng)基時，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸汽下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調(diào)整pH。
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