zui近看大家常提到支原體污染，就翻了翻書，做了些筆記，現(xiàn)在貼出來和大家分享：
支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(zui小直徑0．2um)并獨立生活的微生物．約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。
支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。電鏡下觀察支原體膜為三層結(jié)構(gòu)．其有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且無顆粒群
或束。
支原體代謝需固醇類物質(zhì)、部分種類需要、O 2或葡萄糖，每一種支原體都有自身持點。多數(shù) 支原體適合于偏堿條件下生存(PH7．6—8．0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。
支原體污染細胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢．甚至從培養(yǎng)器皿脫落。
為確定有無支原體污染可做如下檢酗：
①相差顯微境檢測：將細胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶內(nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內(nèi)含有的DNA 著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細胞接種蓋玻片上，在細胞未長滿前取出玻片，用不合酚紅的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向細胞面滴加pH5．5磷酸緩沖液數(shù)滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜 表面的亮綠色小點。
③電鏡檢查；用掃描電鏡方法簡便快速．也可以利用透射電鏡。
④DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高．但方法較為復(fù)雜
支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長，營養(yǎng)要求比細菌高。
細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%，支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達，又不能通過可視法對其進行檢測，而且 它對細胞的生長率影響較小，不易引起注意。國內(nèi)外研究表明，95％以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是zui常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調(diào)查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。
支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。
組織細胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體zui突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如 -內(nèi)酰胺類、等*不敏感；對多粘菌素（polymycin）、、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些；其他類抗生素如氨基糖苷類、對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。InvivoGen公司研究開發(fā)的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體，不影響細胞本身的代謝，并且用M-Plasmocin處理過的培養(yǎng)細胞，不會重新感染支原體。