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糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟：
1.標(biāo)本的采取和保存
可用作 ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛體液(如血清)、分泌物(唾液)和排池物(如尿液、業(yè)便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成
有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)走(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如龔便和某些分泌物)。大部分 ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有
除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在 ELISA中血漿和血清可
血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集應(yīng)注意避兔溶血
細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)以HRP為標(biāo)記的 ELISA;測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
2.試的淮備:
按試劑盒說(shuō)明書的要求注備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。 ELISA中用的蒸餾水或去離子水包括用于洗滌的應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的中液
應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試剤應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試剤盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存
在 ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加加酶結(jié)合物加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在 LEISA板孔的底部避兔加在孔壁上
出不可產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般用微量加樣器按規(guī)定的量加入板孔中。毎次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴以兔發(fā)生交叉污染也可用一次性的定量塑
料管加加樣。有此測(cè)定(如司接法EISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液再在其中加入
血清標(biāo)本然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器使加液過(guò)程迅速完成。
4:呆溫:
在 ELISAI中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)即加標(biāo)本和加加結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間這一保溫過(guò)程稱為溫育(i
ulation),有人稱之為孵育,在 ELISA中似不恰當(dāng)。 ELISA固相兔疫測(cè)定抗原、抗體的結(jié)合只在國(guó)相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為逐步平衡的過(guò)程因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的毎標(biāo)記抗體與同相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么 ELISA反應(yīng)
總是需要一定時(shí)間的溫育。
5.洗淙:
洗滌在 ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步張但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。 ELISA是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和姞合的標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相。
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