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細(xì)胞簡介：

乳腺導(dǎo)管位于胸部的皮下組織中，是的主要構(gòu)成組織之一，也是乳汁的排泄管道。乳腺管的主要功能是乳汁的排泄和儲存每個(gè)乳腺葉都有一個(gè)輸乳管，輸乳管會在近處形成膨大的輸入管竇，末端變細(xì)并開口于。

乳腺被結(jié)締組織分隔為 15-25個(gè) 葉，每個(gè)葉又分為若干小葉，每個(gè)小葉是一個(gè)復(fù)管泡狀腺。腺泡上皮為單層立方或柱狀，導(dǎo)管包括小葉內(nèi)導(dǎo)管、上間導(dǎo)管和總導(dǎo)管。小葉內(nèi)導(dǎo)管多為單層柱狀或立方上皮，小葉間導(dǎo)管為復(fù)層柱狀上皮，總導(dǎo)管又稱輸乳管，開口于，管壁為復(fù)層扁平上皮，下表皮相續(xù)。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常乳腺組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白（PCK）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 上皮 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

細(xì)胞AURORA-A激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

細(xì)胞GSK-3BETA蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒

淀粉分支酶（SBE）測試盒

胞漿微型RNA（miRNA）超濾法分離試劑盒

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)elisa檢測試劑盒

細(xì)胞C-MET激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

人Podocin elisa分析檢測試劑盒

大鼠β-防御素(β-Defensins)elisa檢測試劑盒

小鼠生長(GH)elisa檢測試劑盒

乙?；M蛋白H2B (Lys15)鼠單克隆抗體 Histone H2B (Acetyl K16)

尤文氏肉瘤相關(guān)EWS蛋白抗體 EWSR1

二肽氨基肽酶3抗體 DPP3

防御素β1/Defensin β1抗體 Defensin beta 1

Grp94相鄰核苷酸酶抗體 NT5DC3

G蛋白偶聯(lián)受體21抗體 GPR21

囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SFT2C抗體 SFT2C

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白2抗體 SPFH2

AF488標(biāo)記的抗小鼠Ly-6G/Ly-6C單克隆抗體 mouse Ly-6G/Ly-6C, Alexa Fluor 488 conjugated

AF680標(biāo)記的脂聯(lián)素受體1抗體 Adiponectin Receptor 1, Alexa Fluor 680 conjugated

膠原三股螺旋重復(fù)蛋白1抗體 CTHRC1

精酶2抗體 Arginase II

SETD6蛋白抗體 SETD6

SYCE1蛋白抗體 SYCE1

源盒蛋白HOXA9抗體 HOXA9

味覺感受器蛋白T2R6抗體 T2R6

小鼠CD4分子(CD4)elisa檢測試劑盒

大鼠脯羥化酶(PHD)elisa生化檢測試劑盒

PHD ELISA Kit

豚鼠白介素18(IL-18)elisa生化檢測試劑盒

兔乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞IL-18ELISAKit