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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人筋膜成纖維分離自筋膜組織；筋膜，解剖結(jié)構(gòu)名。指肌肉的堅(jiān)韌部分。附于骨節(jié)者為筋，包于肌腱外者為膜。是聯(lián)絡(luò)關(guān)節(jié)、肌肉，主 司運(yùn)動(dòng)的組織。為肝所主，并賴肝血的滋養(yǎng)。筋膜是一類結(jié)締組織，結(jié)締組織除了筋膜還有其他表現(xiàn)的形式，如腱、韌帶、腱膜和疤痕組織。在不同的地方結(jié)締組織也有著不同的名稱：腦和脊髓周圍的是腦膜；骨周圍是骨膜；心臟周圍是心包；腹腔內(nèi)表面的是腹膜；在皮下層包圍整個(gè)身體和封閉肌肉和肌群的叫筋膜。筋膜位于肌肉的表面，分為淺筋膜和深筋膜兩種。（1）淺筋膜位于皮下，又稱皮下筋膜，由疏 松結(jié)締組織構(gòu)成，其內(nèi)含有脂肪、淺靜脈、皮神經(jīng)以及淺淋巴結(jié)和淋巴管等。脂肪的多少因身體部位、性別和營(yíng)養(yǎng)狀況不同。臨床常作的皮 下注射，即將藥液注入淺筋膜內(nèi)。（2）深筋膜 位于淺筋膜深面，又稱固有筋膜，由致密結(jié)締組織構(gòu)成，遍于全身且互相連續(xù)。深筋膜包被 肌或肌群、腺體、大血管和神經(jīng)等形成筋膜鞘。四肢的深筋膜。伸入肌群之間與骨相連，分隔肌群，稱肌間隔。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織 的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞呈梭形或扁的星狀，具有突起。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人筋膜成纖維采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人筋膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人筋膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠蛋白激酶Cθ(PKCθ)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： PKCθ ELISA Kit

N terminal brain naiuretic peptide (-proBNP) ELISA Kit 人N端前腦素(-proBNP)檢測(cè)試劑盒

Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAkit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforCyclin-D1ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D1

細(xì)胞色素P450亞酶CYP2E(AH)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

MMP9重組人 MMP-9 / CLG4B 蛋白 Protein

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(TOP2)重組蛋白 Recombinant Topoisomerase II (TOP2)

XG重組人 Glyco蛋白 Xg / PBDX 蛋白 Protein

CHI3L1 Protein Human 重組人 CHI3L1 / YKL40 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Japanese white-eye/Hong Kong/1038/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

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小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA 試劑盒 96T/48T

The formation of red blood cells of rat prolactin receptor (EPOR) ELISA Kit 大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)檢測(cè)試劑盒

Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickenverylowdensitylipoprotein,VLDL檢測(cè)試劑盒雞極低密度脂蛋白(VLDL)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞TUBULIN蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MouseErythropoietin,EPOELISAKit小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人筋膜成纖維細(xì)胞小鼠酶(CA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PLGF)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠羧甲基賴酸（CML）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。