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細(xì)胞簡介：

人脈絡(luò)膜黑色素分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時，堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對整個視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用。

方法簡介：

公司實驗室分離的人脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞先用消化、后-膠原酶混合消化結(jié)合專用培養(yǎng)基篩選法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人脈絡(luò)膜黑色素經(jīng)Dopa染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 長梭形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子白介素1(IL-1)ELISA 試劑盒

Human von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)檢測試劑盒

HumanBlockingaibody,BAELISAKit 人封閉抗體(BA)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humaneyemuscleaibody,EMAb檢測試劑盒人抗眼肌抗體(EMAb)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織TIE2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

humanoncostatinMreceptor,OSMRELISAKit人制瘤素M受體(OSMR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

TNFSF12重組食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

TPH1重組人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

MERTK Protein Mouse 重組小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

TNFSF12重組食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

MERTK Protein Mouse 重組小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TPH1重組人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein

豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)檢測試劑盒 ，英文名： CGRP ELISA Kit

Human factor related apoptosis (FAS/CD95) ELISA Kit 人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)檢測試劑盒

MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforbFGF-9(Humanbasicfibroblastgrowthfactor9)ELISAKit人堿性成纖維細(xì)胞生長因子9

細(xì)菌同還原酶(aldo-ketoreductase)總活性比色法定量檢測試劑20次

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit兔子白介素6(IL-6)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞溶酶體相關(guān)膜蛋白3   英文名稱：   Human Lysosomal Associated membrane protein 3   規(guī)格：      英文縮寫：   LAMP3

人乳酸脫氫酶   英文名稱：   Human Lactate Dehydrogenase   規(guī)格：      英文縮寫：   LDH

人   英文名稱：   lysozyme   規(guī)格：      英文縮寫：   LZM/LYS

甘露聚糖結(jié)合凝集素絲酸肽酶-2   英文名稱：   mannan-binding lectin associated serine proteases   規(guī)格：      英文縮寫：   MASP-2

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。