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細胞簡介：

人胃癌成纖維分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居位，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉移的過程中，涉及諸多復雜的過程，如細胞外基質的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境(Tumor mircoenvironment)的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質(Extracellular matrix，ECM)構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內皮細胞，間充質干細胞等，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據表明，腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究多也是主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的人胃癌成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的人胃癌成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人胃癌成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

神經營養(yǎng)素 4(-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T  

骨橋蛋白 ( Osteopoin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國 IBL

OX-40 ELISA Kit   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender

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角蛋白1(KRT1)重組蛋白 Recombinant Keratin 1 (KRT1)

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IL12RB1 Protein Human 重組人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 蛋白

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人胃癌成纖維細胞大鼠γ-基受體亞基α1(GABRA1)試劑盒 ，英文名： GABRA1 ELISA Kit

Mice, superoxide dismase (SOD) ELISA Kit 小鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒

ELISA 小鼠基質金屬蛋白酶-2(mouse MMP-2)  進口分裝

CLIAKitforIL-17ELISAKIT大鼠白介素17

通用型亮(leucine)含量比色法定量試劑盒20次

ELISAKitADAMTS13/vWF-cp大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。