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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔腸神經(jīng)嵴干分離自腸組織；神經(jīng)嵴干細(xì)胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞，起源于胚胎期的神經(jīng)管背側(cè)，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上有著顯著不同，NCSC可表達(dá)低親和力神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質(zhì)細(xì)胞，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞與之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)、黑色素細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的NCSC，被稱(chēng)為腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸神經(jīng)嵴干采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸神經(jīng)嵴干經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：球形

傳代特性：可傳1-3代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腸神經(jīng)嵴干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： TGFβR1 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgA (ACA-IgA) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)檢測(cè)試劑盒

MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanlatemembraneprotein-1,LMP-1ELISAKit人潛伏膜蛋白1

微管蛋白(tubulin)結(jié)合分子(bindingmolecules)檢測(cè)試劑盒20次

αFodrinIgG/IgA大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA

SERPINA1A重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 Protein

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2)

CETN2重組人 CETN2 / Centrin 2 蛋白 Protein

HIF1A Protein Human 重組人 HIF-1 alpha / HIF1A 蛋白

CD4 Protein Ferret 重組雪貂 CD4 / Leu-3 蛋白

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2)

HIF1A Protein Human 重組人 HIF-1 alpha / HIF1A 蛋白

SERPINA1A重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 Protein

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CETN2重組人 CETN2 / Centrin 2 蛋白 Protein

小鼠p53(p53)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat glycogen phosphorylase isoenzyme BB (GP-BB) ELISA Kit 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測(cè)試劑盒

HumanAndrostenedione,ASDELISAKit 人雄(ASD)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumancoagulationfactorⅩ,FⅩ檢測(cè)試劑盒人Ⅹ(FⅩ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白轉(zhuǎn)甲基酶活性檢測(cè)試劑盒(H3-K4)20次

HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit人復(fù)制蛋白A(RPA-70)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞兔型纖溶酶原激活物受體檢測(cè)試劑盒   兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒、兔型纖溶酶原激活物受體檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔型纖溶酶原激活物檢測(cè)試劑盒   兔型纖溶酶原激活物試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔型纖溶酶原激活物試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔型纖溶酶原激活物試劑盒、兔型纖溶酶原激活物檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3檢測(cè)試劑盒   兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3試劑盒、兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔粒細(xì)胞集落刺激因子檢測(cè)試劑盒   兔粒細(xì)胞集落刺激因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔粒細(xì)胞集落刺激因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔粒細(xì)胞集落刺激因子試劑盒、兔粒細(xì)胞集落刺激因子檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。