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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔滑膜成纖維分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu)，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會累及滑膜。而滑膜細胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，同時在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎（OA）以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P(guān)節(jié)的各個組成部分，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用，共同加速關(guān)節(jié)的退變。滑膜細胞是構(gòu)成滑膜層的大細胞群體，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布?；び?span>A型（巨噬樣滑膜細胞）、B型（成纖維樣滑膜細胞）以及C型（樹突細胞樣滑膜細胞）細胞組成。

方法簡介：

實驗室分離的兔滑膜成纖維采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔滑膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔滑膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠β細胞素(BTC)試劑盒   96T/48T

小鼠β葡萄糖酸苷酶(βGD)試劑盒   96T/48T

小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)試劑盒   96T/48T

小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒   96T/48T

小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat thioredoxin (x) ELISA Kit 大鼠硫氧化還原蛋白(x)試劑盒

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 人高敏甲狀腺素(u-T4)試劑盒 96T/48T 進口分裝

humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCA試劑盒人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次

humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

APCS重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原

BNIP3L重組人 BNIP3L 蛋白 Protein

F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

FZD1 Protein Mouse 重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原

F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

APCS重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

FZD1 Protein Mouse 重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白

BNIP3L重組人 BNIP3L 蛋白 Protein

兔滑膜成纖維細胞大鼠淋巴毒素β(LTβ)試劑盒 ，英文名： LTβ ELISA Kit

Mouse inhibin A (INH-A) ELISA Kit 小鼠抑制素A(INH-A)試劑盒

RatEndomeiumAibody,EMAbELISAKit 大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGamma-ECS(HumanGamma-glamylsysteinesyhetase)ELISAKit人γ谷氨酰半胱合成酶

細胞骨架(肌動蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑盒10次

RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit大鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T