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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔卵巢成纖維分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢，但是部分魚(yú)類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu)，而所有鳥(niǎo)類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的卵巢成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細(xì)胞大多分布于卵巢表面，其主要特點(diǎn)和功能：①成纖維細(xì)胞在體外易于培養(yǎng)；②卵巢損傷后，成纖維細(xì)胞能修復(fù)和重塑卵巢；③能在卵巢炎癥時(shí)有效控制炎癥擴(kuò)散。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔卵巢成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔卵巢成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔卵巢成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠0脂酰絲酸(PS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠0酸甘油酯(PC/CPG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat calcitonin (CT) ELISA Kit 大鼠降鈣素(CT)試劑盒

Humanheatshockprotein27,HSP-27ELISAKit 人熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAcidPhosphatase,ACP試劑盒人酸性0酸酶(ACP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常人體腎組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cardiolipinaibodyIgA,ACA-IgAELISAKit小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

PLAT重組人 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

信號(hào)素3B(SEMA3B)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3B (SEMA3B)

STC1重組人 STC-1 / Stanniocalcin-1 蛋白 Protein

CTSV Protein Human 重組人 Cathepsin V / Cathepsin L2 / Preproprotein 蛋白

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

信號(hào)素3B(SEMA3B)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3B (SEMA3B)

CTSV Protein Human 重組人 Cathepsin V / Cathepsin L2 / Preproprotein 蛋白

PLAT重組人 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

STC1重組人 STC-1 / Stanniocalcin-1 蛋白 Protein

兔卵巢成纖維細(xì)胞大鼠蘭尼定受體1(RYR1)試劑盒 ，英文名： RYR1 ELISA Kit

Mouse progesterone / progesterone (PROG) ELISA Kit 小鼠孕激素/孕酮(PROG)試劑盒

Ratglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISAKit 大鼠谷脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFT4(MouseFreeThyroxine)ELISAKit小鼠游離甲狀腺素

細(xì)胞黑色素含量比色法定量試劑盒20次

RatprocollagenⅠN-terminalpeptide,PⅠNPELISAKit大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。