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細胞簡介：

兔牙乳頭分離自牙乳頭組織；牙乳頭細胞來源于外胚間充質(zhì)，具有多向分化潛能，是體內(nèi)分化為成牙本質(zhì)細胞的前體細胞，該細胞在牙發(fā)育和牙體牙髓損傷修復過程中起重要作用。牙乳頭細胞為未分化的間充質(zhì)細胞，有少量微細的膠原纖維分散在細胞外間隙。在鐘狀期，被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多，并出現(xiàn)細胞的分化。在內(nèi)釉上皮的誘導下，牙乳頭外層細胞分化為高柱狀的成牙本質(zhì)細胞。這些細胞在切緣或牙尖部為柱狀，在牙頸部細胞尚未分化成熟，為立方狀。牙乳頭在牙發(fā)育中有重要作用?，F(xiàn)已證明，牙乳頭是決定牙形狀的重要因索。例如，將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合，結果形成磨牙；與此相反，切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合，結果形成切牙。牙乳頭還可以誘導非牙源性的口腔上皮形成成釉器。

方法簡介：

實驗室分離的兔牙乳頭采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔牙乳頭經(jīng)DMP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔牙乳頭體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠轉鐵蛋白受體2(TFR2)檢測試劑盒 ，英文名： TFR2 ELISA Kit

Ma beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 馬β內(nèi)啡肽(β-EP)檢測試劑盒

Mousesolubleclusterofdiffereiation30,sCD30ElisaKit 小鼠可溶性白細胞分化抗原30(sCD30)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanleukoregulin,LRELISAKit人白細胞調(diào)節(jié)素

唾液酸(SA)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitAsAb大鼠抗抗體

PRDX1重組小鼠 Peroxiredoxin 1 / PRDX1 蛋白 Protein

Ras相關C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)重組蛋白 Recombinant Ras Related C3 Botulinum Toxin Substrate 1 (Rac1)

C10ORF54重組人 B7-H5 / Gi24 / VISTA 蛋白 Protein

IL17F Protein Human 重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白

IL21R Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

發(fā)動蛋白2(DNM2)重組蛋白 Recombinant Dynamin 2 (DNM2)

IL17F Protein Human 重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白

EDA2R重組小鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL23R Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL23R / IL23 Receptor 蛋白 (Fc 標簽)

GADD45G重組人 GADD45G / CR6 蛋白 Protein

豚鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat sex hormone binding globulin (SHBG) ELISA Kit 大鼠性激素結合球蛋白(SHBG)檢測試劑盒

Humaubularbasememembraneaibogy,TBMELISAKit 人抗腎小管基底膜抗體(TBM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCTX-2檢測試劑盒人骨退化特異標志物(CTX-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織EPHA3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit人抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔牙乳頭細胞山羊促生長激素釋放激素(GHRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

山羊生長激素釋放多肽(GHRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

山羊白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

山羊白介素10(IL-10)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。