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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會(huì)陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時(shí)，可以引起子宮脫垂。子宮內(nèi)膜即黏膜，由上皮（屬單層柱狀上皮，有分泌細(xì)胞和纖毛細(xì)胞二種）和固有膜（由結(jié)締組織構(gòu)成，其內(nèi)有大量的星形細(xì)胞，稱(chēng)為基質(zhì)細(xì)胞）組成，子宮內(nèi)膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層，功能層較厚，約占內(nèi)膜厚度的4/5；基底層較薄較致密，約占1/5，功能層可剝脫，而基底層剝脫。子宮內(nèi)膜構(gòu)成雌性哺乳動(dòng)物子宮壁的內(nèi)層，位于子宮腔面，在動(dòng)物生殖生理活動(dòng)中占有重要地位。子宮和子宮內(nèi)膜是維持雌性動(dòng)物生理功能和生育能力的重要器官，子宮內(nèi)膜的再生修復(fù)是子宮的重要生理功能。體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(lèi)(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠β內(nèi)酰胺酶抑制劑(BLI)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat somatostatin (SS) ELISA Kit 大鼠(SS)試劑盒

HumanCollagenaseIELISAKit 人膠原酶I(CollagenaseI)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCeruloplasmin,CP/CER試劑盒人銅藍(lán)蛋白(CP/CER)試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米MON810品系試劑盒20次

HumanSerotonin,STELISAKit人血清素/血清胺(ST)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IFNA2重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干擾素調(diào)節(jié)因子抗原

FLRT2重組人 FLRT2 蛋白 Protein

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干擾素調(diào)節(jié)因子抗原

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IFNA2重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

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小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF-23)試劑盒 ，英文名： FGF-23 ELISA Kit

Mouse B cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit 小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒

ELISA 小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(mouse sCD40L)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLepIgG(HumanLeptospiraIgG)ELISAKit人鉤端IgG

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitIL-1白介素1

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。